для чего нужна камера горяева

13.10.202325.06.2023 admin 0 Comments

Камера Горяева. Практическое применение

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Практическое применение камеры Горяева

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Подсчет форменных элементов крови

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Формула для подсчета эритроцитов

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

Формула для подсчета лейкоцитов

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

2. Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

Таблица нормальных значений:

Форменные элементы	Норма
Эритроциты	Мужчины	4 000 000 – 5 100 000 в 1 мкл
Эритроциты	Женщины	3 700 000 – 4 700 000 в 1 мкл
Лейкоциты	4 000 – 9 000 в 1 мкл

Подсчет форменных элементов в мочевом осадке

Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:

где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)

Источник

Для чего нужна камера горяева

Работа с камерой Горяева

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 мм
Размеры большого квадрата камеры Горяева 0,2×0,2 мм
Глубина камеры 0,1 мм
Объем жидкости под 1 малым квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)
Объем жидкости под 1 большим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)
Объем камеры Горяева 0,9 мм3 (мкл)

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.

Рис 1. Сетка камеры Горяева

Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)

В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Источник

Устройство камеры Горяева.

Подготовка счетной камеры Горяева

Протереть корпус камеры с сеткой и покровное стекло насухо

Притереть покровное стекло к поверхности камеры Горяева до появления «радужных колец» (колец Ньютона)

Пипеткой отобрать каплю разведенной крови из пробирки, предварительно перемешав содержимое и поднести пипетку к краю покровного стекла. Камера заполняется по принципу капиллярности.

Кровь должна заполнить равномерно все пространство камеры с сеткой.

Камеру оставляют на 1-2 минуты для оседания форменных элементов и затем производят подсчет с помощью микроскопа при малом увеличении (объектив х8, окуляр х10), конденсор опущен, диафрагма закрыта.

Источники ошибок при подсчете форменных элементов крови.

1. Образование сгустка. Взятие крови следует производить быстро и ловко, т.к. образование сгустка приводит к снижению количества форменных элементов.

2. Образование пузырька воздуха в счетной камере Горяева

3. Неправильное притирание покровного стекла искажает объем камеры и, следовательно, результат исследования.

4. К подсчету форменных элементов приступают через 1-2 мин после заполнения камеры

5. Недоброкачественность разводящей жидкости может привести к разрушению клеток

6. Недостаточное количество подсчитанных квадратов, нарушение техники подсчета в квадрате.

В норме содержание лейкоцитов в 1 литре крови составляет 4,0 – 9,0 х 10 9 /л. Увеличение содержания лейкоцитов называется лейкоцитоз, уменьшение содержания – лейкопения.

Реактивы и оборудование:

3% р-р уксусной кислоты

центрифужная пробирка

пипетка Сали

пипетка на 1 мл

камера Горяева.

Подсчет лейкоцитов производят в 100 больших пустых квадратах, что соответствует 1600 малым квадратам.

Расчет количества лейкоцитов в 1 литре крови производят, исходя из разведения крови, числа сосчитанных квадратов, объема 1 малого квадрата по формуле:

Лейкоциты = Х х 4000 х 20 х 10 6

где: Х – это количество лейкоцитов, сосчитанных в камере Горяева

10 6 – коэффициент пересчета 1 мм 3 на 1 литр крови.

Сокращенная формула подсчета лейкоцитов в 1 литре крови:

Лейкоциты = Х х 50 х 10 6 /л

Клиническое значение определения количества лейкоцитов:

Лейкоцитоз –наблюдается при лейкозах, в детском возрасте, после приема пищи, при воспалительных и гнойных заболеваниях. Лейкопенияможет быть при лучевой болезни, циррозе печени, метастазах рака, гипо – и апластической анемии и у спортсменов при длительных тренировках.

Источник

КАМЕРЫ СЧЁТНЫЕ

КАМЕРЫ СЧЁТНЫЕ — приборы для подсчета форменных элементов крови, мочи и цереброспинальной жидкости, а также микроорганизмов. Предложена К. с. франц. физиологом Малассе (L. Ch. Malassez) в 1874 г.

К. с. представляют собой толстое предметное стекло с углублением, на дне к-рого выгравирована счетная сетка; над углублением накладывают шлифованное покровное стекло. Постоянная высота К. с. обеспечивается плотным притиранием покровного и предметного стекол до образования радужных ньютоновых колец (полосы интерференции).

Структурными элементами всех типов сеток являются большие и малые квадраты. Сетки различных типов — Тома, Бюркера, Предтеченского, Тюрка, Нейбауэра, Горяева, Фукса — Розенталя и др.— отличаются различным группированием больших и малых квадратов.

Известные величины — высота камеры, площадь сетки и ее делений и разведение взятой для исследования крови — позволяют высчитать количество форменных элементов в определенном объеме (1 мкл) крови (или другой среды).

Различают открытые и закрытые К. с. В закрытой камере покровное стекло притирают после ее заполнения, и при этом в нее могут попасть пузырьки воздуха. Такие К. с. (Тома — Цейсса с сеткой Тома, Дунгера с особой сеткой) неудобны в работе и не используются.

Открытые камеры (рис. 1) заполняются после притирания покровного стекла. Они имеют две сетки на одном предметном стекле. Пластинки с выгравированными сетками отграничены желобками одна от другой, а также от остальной части предметного стекла. Наличие желобков дает возможность регулировать заполнение камер. Некоторые камеры снабжены металлическими зажимами, фиксирующими покровное стекло.

Методика работы

Перед работой предметное стекло К. с. и шлифованное покровное стекло моют под струей водопроводной воды и насухо вытирают. Затем плотно притирают покровное стекло к камере (до появления радужных ньютоновых колец, ибо только при этом условии объем К. с. постоянен).

Содержимое пробирки перед заполнением камеры несколько раз перемешивают, затем оплавленным концом стеклянной палочки отбирают из пробирки, наклоняя ее, каплю крови и наносят на предметное стекло у самого края покровного стекла. Если одной капли крови недостаточно для полного заполнения К. с., добавляют еще каплю. Если кровь взята в смеситель, то первые капли из капилляра смесителя выпускают, а К. с. заполняют каплей из ампулы смесителя. Остатки жидкости с предметного стекла удаляют марлевым тампоном. Подсчет начинают через 3 мин. после заполнения камеры (за это время происходит оседание форменных элементов крови) под микроскопом при малом увеличении (объектив X 8, окуляр X 10 или X 15) и затемненном поле зрения (с прикрытой диафрагмой или при несколько опущенном конденсоре). Счету подлежат клетки, лежащие внутри квадрата (рис. 4). Клетки, пересеченные сторонами квадратов, считают следующим образом: если более половины клетки находится внутри квадрата, то ее считают, если вне — ее не считают. Клетки, пересекаемые линиями точно посередине, считают на двух смежных, правой и верхней, линиях квадратов и не считают на двух других. При использовании соответствующих разводящих р-ров эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, эозинофилы, базофилы и ретикулоциты могут быть подсчитаны в камере Горяева.

Эритроциты считают в 80 малых квадратах, т. е. в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали. Расчет проводится по формуле:

где а — количество эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратах, 80 — количество сосчитанных малых квадратов, 200 — степень разведения крови, 4000 — множитель для получения содержания эритроцитов в 1 мкл крови (объем малого квадрата 1/4000 мкл). Практически количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах, умножают на 10 000.

Лейкоциты подсчитывают в 1600 малых квадратах (в 100 больших квадратах). Расчет проводится по формуле:

X = a * 4000 * 20 /1600,

где а — количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, 1600 — количество сосчитанных малых квадратов, 20 — степень разведения крови, 4000 — множитель для получения содержания лейкоцитов в 1 мкл крови. Практически количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, умножают на 50.

Тромбоциты подсчитывают в 400 малых квадратах (25 больших квадратах по диагонали сетки). Реактивами для разведения могут быть изотонический р-р хлорида натрия, различные р-ры, консервирующие тромбоциты и гемолизирующие эритроциты.

Считают тромбоциты под обычным микроскопом и с помощью фазово-контрастного устройства (см. Фазово-контрастная микроскопия) для более четкого выявления их. После разведения пробирку с кровью оставляют на 25—30 мин. для гемолиза эритроцитов. Затем содержимое пробирки повторно перемешивают и заполняют К. с., к-рую помещают на 5 мин. во влажную камеру (напр., чашки Петри с влажной ватой) для оседания тромбоцитов. Расчет проводят по формуле:

где а — количество тромбоцитов,, подсчитанное в 400 малых квадратах, 200 — степень разведения крови, 400 — число сосчитанных малых квадратов, 4000 — множитель для получения содержания тромбоцитов в 1 мкл крови. Практически количество тромбоцитов, подсчитанное в 400 малых квадратах, умножают на 2000.

Количество базофилов и эозинофилов подсчитывают в камере Горяева в 1600 малых квадратах, как и лейкоциты. Практически подсчитанное количество базофилов и эозинофилов умножают на 50.

Ретикулоциты подсчитывают в камере Горяева в 80 малых квадратах, как эритроциты. Практически подсчитанное количество ретикулоцитов умножают на 10 000.

Определение общего количества клеток в цереброспинальной жидкости (см.) лучше производить в камере Фукса — Розенталя (из-за небольшого числа лейкоцитов в цереброспинальной жидкости). Подсчитывают по всей сетке (256 больших квадратов) под малым увеличением микроскопа (окуляр X 15, объектив х 8).

При очень большом количестве клеток допускается подсчет половины сетки (с последующим умножением результата на 2). Расчет проводят по формуле:

где а — количество клеток, подсчитанное в 256 квадратах, 11/10— степень разведения, 3,2— объем камеры в мкл. Практически при подсчете в камере Фукса — Розенталя число лейкоцитов делят на 3.

В камере Горяева клетки цереброспинальной жидкости считают не менее 3 раз (также всю площадь), каждый раз заполняя камеру заново, затем берут среднее арифметическое. Расчет проводят по формуле:

где а — среднее арифметическое количество клеток, подсчитанное по всей сетке, 11/10 — степень разведения, 0,9 — объем камеры в мкл. Практически число подсчитанных лейкоцитов умножают на 1,2.

Количественное определение форменных элементов в моче проводит в камерах Фукса — Розенталя, Горяева: подсчет эритроцитов и лейкоцитов при среднем увеличении микроскопа, подсчет цилиндров — при малом. Степень разведения мочи зависит от метода исследования (см. Моча).

Подсчет в К. с. не вполне точен. Ошибка метода составляет от 10 до 20% в зависимости от количества подсчитываемых элементов.

Уход и условия хранения

Следует предохранять камеры от загрязнения и попадания пыли на сетку. После работы камеру и покровное стекло моют под струей водопроводной воды и осторожно, но тщательно вытирают чистой салфеткой (можно марлевой). Затем завертывают в бумагу и убирают в коробку.

Библиография: Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, под ред. Е. А. Кост, с. 22, М., 1975.

Источник

Ответы на вопросы

для чего нужна камера горяева

Камера Горяева. Практическое применение